1965年中國科學家人工合成了具有生物活性的結晶牛胰島素，摘取了人工合成蛋白質的桂冠，如圖是利用基因工程生產人胰島素過程中使用的質粒及目的基因的部分結構。請回答下列問題。
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（1）質粒上ori序列的堿基特點是 A和TA和T比值較高，圖示胰島素基因的轉錄以 ②②鏈作為模板。
（2）在設計PCR引物時最好在引物的 5′5′端添加限制酶 EcoRⅠ和XhoⅠEcoRⅠ和XhoⅠ的識別序列，PCR反應體系中引物的延伸需要TaqDNA聚合酶，此酶需要 Mg2+Mg2+（離子）的激活。
（3）生產過程中目的基因是利用胰島B細胞中的mRNA反轉錄得到的胰島素基因，不直接使用細胞中酶切獲得的的胰島素基因原因是 胰島B細胞中的mRNA逆轉錄得到的胰島素基因中無內含子序列。能夠在大腸桿菌中表達正確的蛋白質胰島B細胞中的mRNA逆轉錄得到的胰島素基因中無內含子序列。能夠在大腸桿菌中表達正確的蛋白質。
（4）科學家運用大引物PCR定點突變技術對胰島素第28位氨基酸實現(xiàn)了替換，獲得了速效胰島素類似物產品。相關原理如圖所示。
①第一次PCR至少需要 22個循環(huán)才能獲得相應的大引物模板，第二次PCR應選用大引物兩條鏈中的 BB（填“A”或“B”），若第二次PCR計劃循環(huán)n次，至少需要大引物 2n-12n-1個。
②β-半乳糖苷酶可以分解無色的X-gal產生藍色物質使菌落呈現(xiàn)藍色，否則菌落為白色。將轉化后的大腸桿菌接種到添加了 氨芐青霉素和X-ga1氨芐青霉素和X-ga1的培養(yǎng)基上，若觀察到菌落呈現(xiàn)白色，則表明 該菌落即為含有重組質粒的大腸桿菌菌落該菌落即為含有重組質粒的大腸桿菌菌落。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】A和T；②；5′；EcoRⅠ和XhoⅠ；Mg2+；胰島B細胞中的mRNA逆轉錄得到的胰島素基因中無內含子序列。能夠在大腸桿菌中表達正確的蛋白質；2；B；2n-1；氨芐青霉素和X-ga1；該菌落即為含有重組質粒的大腸桿菌菌落
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/10/12 15:0:1組卷：22引用：4難度：0.6
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發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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