通過定點誘變可以在體外改造目的DNA分子，進而研究基因的表達以及蛋白質的結構與功能之間的關系。經(jīng)典的大引物PCR定點誘變技術成為基于PCR的定點誘變技術中應用最普遍的方法，操作過程如圖甲。研究者欲改造某基因并將其導入大腸桿菌的質粒中保存，該質粒含有氨青霉素抗性基因、LacZ基因及一些酶切位點，結構如圖乙。回答下列問題：
（1）利用大引物PCR進行定點誘變需要進行兩輪PCR（PCR1和PCR2），在PCR1中，至少需要

2

2

個循環(huán)才能獲得相應的大引物模板。在PCR2中，要獲得帶有誘變點的改良基因，引物應選用大引物兩條鏈中的

②

②

（填“①”或“②”）。
（2）為實現(xiàn)質粒和改良基因的高效連接，選用限制酶

XmaⅠ

XmaⅠ

。為將改良基因構建在質粒上，還需要

BglⅡ

BglⅡ

等酶，切除相應粘性末端與改良基因

CTAG

CTAG

一側進行配對。
（3）在構建改良基因表達載體時，有的質粒含有改良基因，有的質粒為空白質粒，將含上述組件的溶液加入到大腸桿菌菌液中，適宜溫度下培養(yǎng)一段時間后，再將菌液涂布在含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

和

β-半乳糖苷

β-半乳糖苷

的平板上。一段時間后，在培養(yǎng)基上出現(xiàn)白色和藍色兩種菌落，其中

白色

白色

菌落含有重組質粒。