熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測(cè)樣本中的DNA含量，其原理是：在PCR反應(yīng)體系中加入與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針，當(dāng)TaqDNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處時(shí)會(huì)水解探針，使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一次，就有一個(gè)熒光分子生成，如圖1所示；在某次檢測(cè)過(guò)程中，得到一條熒光強(qiáng)度的變化曲線，如圖2所示，其中閾值是指反應(yīng)過(guò)程中達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。回答下列問(wèn)題：
（1）PCR技術(shù)的原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制，子鏈延伸的方向是5′端→3′端，原因是 DNA聚合酶只能從引物的3'端添加脫氧核苷酸DNA聚合酶只能從引物的3'端添加脫氧核苷酸。
（2）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增DNA的過(guò)程中，向PCR擴(kuò)增儀中加入了MgCl2，脫氧核苷酸、引物和模板DNA等物質(zhì)，其中MgCl2的作用是 激活DNA聚合酶激活DNA聚合酶，該過(guò)程需要加入耐高溫的DNA聚合酶，不需要加入解旋酶的原因是 PCR利用高溫使DNA雙鏈解開(kāi)PCR利用高溫使DNA雙鏈解開(kāi)。在PCR擴(kuò)增完成后，常使用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳 法來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。
（3）當(dāng)PCR循環(huán)到一定次數(shù)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)“平臺(tái)期”，即熒光強(qiáng)度不再增加，此時(shí)限制因素可能是 熒光探針的數(shù)量、引物的數(shù)量、原料的數(shù)量熒光探針的數(shù)量、引物的數(shù)量、原料的數(shù)量（答出2點(diǎn)）。
（4）為了讓哺乳動(dòng)物能夠批量生產(chǎn)藥物，研究人員將利用PCR技術(shù)獲取的藥用蛋白基因與乳腺中特異性表達(dá)的基因的啟動(dòng)子等調(diào)控元件重組在一起，通過(guò) 顯微注射顯微注射的方法導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中，導(dǎo)入并培育成功后，該藥用蛋白基因在 乳腺乳腺細(xì)胞中表達(dá)。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】DNA半保留復(fù)制；DNA聚合酶只能從引物的3'端添加脫氧核苷酸；激活DNA聚合酶；PCR利用高溫使DNA雙鏈解開(kāi)；瓊脂糖凝膠電泳；熒光探針的數(shù)量、引物的數(shù)量、原料的數(shù)量；顯微注射；乳腺
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/20 8:0:9組卷：17引用：2難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過(guò)的兩個(gè)過(guò)程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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