“多發(fā)性骨性連接綜合征”是由編碼成纖維細胞生長因子（FGF9）的基因突變所致，患者FGF9基因中某堿基對發(fā)生替換，使FGF9中相應的氨基酸發(fā)生替換?？蒲腥藛T欲利用基因工程等技術獲得含有該突變基因的模型小鼠，用來研究該病的發(fā)病機理。圖1表示FGF9cDNA（由FGF9基因轉錄得到的mRNA逆轉錄而來）進行定點突變得到突變型FGF9cDNA的流程，圖2為研究中所用的質粒（SpeⅠ、HindⅢ、SmalⅠ和BglⅡ分別代表相應的限制酶切割位點，以上限制酶切割產生的粘性末端不同）。請回答下列問題：
（1）圖1虛線方框中的a鏈與d鏈在延伸過程中的作用是：既可作為 模板模板又可以起到相當于 引物引物的作用，使 耐高溫的DNA聚合耐高溫的DNA聚合酶能夠從a鏈與d鏈的3’端開始連接脫氧核苷酸。經PCR后獲得的產物一般通過 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。
（2）基因王程操作的核心步驟是 基因表達載體的構建基因表達載體的構建。圖2質粒中的C序列是 啟動子啟動子，它是RNA聚合酶識別和結合的部位。圖1中突變型FGF9cDNA的a鏈所在的DNA單鏈為轉錄的模板鏈，則引物1和引物4的5'端需分別添加 HindⅢ和SpeⅠHindⅢ和SpeⅠ酶的識別序列，才能與圖2中的質粒正確連接。
（3）將構建的重組DNA分子通過 顯微注射顯微注射技術導入受精卵，再經 胚胎移植胚胎移植（答1點即可）等技術使其發(fā)育成模型小鼠。
（4）科研人員發(fā)現，已轉入突變型FGF9cDNA的模型小鼠并未表現出“多發(fā)性骨性連接綜合征”，從分子水平上尋找原因需采用的技術有 PCR、抗原-抗體雜交技術PCR、抗原-抗體雜交技術。（答出2點）
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】模板；引物；耐高溫的DNA聚合；瓊脂糖凝膠電泳；基因表達載體的構建；啟動子；HindⅢ和SpeⅠ；顯微注射；胚胎移植；PCR、抗原-抗體雜交技術
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：49引用：4難度：0.5
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