幽門螺桿菌（Hp）是消化性潰瘍、慢性胃炎、淋巴增生性胃淋巴瘤的主要致病菌，Hp可產(chǎn)生極為豐富的高活性的脲醇，免疫接種對(duì)Hp感染具有預(yù)防作用。研究者利用基因工程制備Hp疫苗的部分流程如圖所示，圖中①一④代表實(shí)驗(yàn)步驟；bp代表堿基對(duì)；Amp^r代表氨芐西林抗性基因，▼代表限制酶的酶切位點(diǎn)；酶1與酶2識(shí)別不同的核苷酸序列?；卮鹣铝袉栴}；

（1）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增lpp20基因時(shí)，需要加入DNA聚合酶，其作用是

催化合成DNA子鏈

催化合成DNA子鏈

。通過控制

溫度

溫度

使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。在實(shí)際操作時(shí)，加入四種脫氧核苷三磷酸作為DNA復(fù)制的原料，每接入一個(gè)核苷酸，伴隨若兩個(gè)特殊化學(xué)鍵斷裂。
（2）質(zhì)粒pZY的作用是

將目的基因（lpp20基因）導(dǎo)入大腸桿菌

將目的基因（lpp20基因）導(dǎo)入大腸桿菌

。在步驟③中一般先用Ca²⁺處理大腸桿菌細(xì)胞，原因是

經(jīng)Ca²⁺處理的大腸桿菌吸收周圍環(huán)境中DNA分子的能力增強(qiáng)

經(jīng)Ca²⁺處理的大腸桿菌吸收周圍環(huán)境中DNA分子的能力增強(qiáng)

。
（3）步驟②中，已知在氨芐西林抗性基因內(nèi)有一段堿基序列，則圖中酶1和酶2的最佳組合是

HindⅢ和XbaⅠ

HindⅢ和XbaⅠ

（注；SpeⅠ：A↓CTAGT；HindⅢ：A↓AGCTT；XbaⅠ：T↓CTAGA）。步驟④中使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)，目的是

將含目的基因（lpp20基因）的大腸桿菌細(xì)胞篩選出來

將含目的基因（lpp20基因）的大腸桿菌細(xì)胞篩選出來

。
（4）臨床上用¹⁴C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp,其基本原理是；

Hp產(chǎn)生的脲酶能將¹⁴C標(biāo)記的尿素分解為氨和¹²CO₂

Hp產(chǎn)生的脲酶能將¹⁴C標(biāo)記的尿素分解為氨和¹²CO₂

。