當(dāng)前位置： 2022-2023學(xué)年山西省大同市陽(yáng)高一中高二（下）期末生物試卷> 試題詳情

IKK激酶參與動(dòng)物體內(nèi)免疫細(xì)胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷（SCID）患兒IKK基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃，導(dǎo)致IKK上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機(jī)制，研究人員利用純合野生鼠應(yīng)用大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)培育出SCID模型小鼠（純合），主要過(guò)程如圖甲、乙。分析回答下列問(wèn)題：
（1）在PCR反應(yīng)體系中，除需加入引物、IKK基因、緩沖液、Mg²⁺等外，還需加入
Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）
Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）
等。
（2）在圖甲獲取突變基因過(guò)程中，需要以下3種引物：

引物A 5'-CCCAACCGGAAAGTGTCA-3'

（下劃線字母為突變堿基）

引物B 5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3'
（下劃線部分為限制酶HindⅢ識(shí)別序列）

引物C 5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3'
（下劃線部分為限制酶SacⅠ識(shí)別序列）

則PCR₁中使用的引物有
引物A和引物B
引物A和引物B
，PCR₂中使用的引物有
引物C
引物C
和圖中大引物的
②
②
（填“①”或“②”）鏈。
（3）PCR的反應(yīng)程序：94℃3min；94℃30s,58℃30s,72℃50s,30個(gè)循環(huán)。在循環(huán)之前的94℃3min處理為預(yù)變性；循環(huán)中72℃處理的目的是
使4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶作用下，合成新的DNA鏈
使4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶作用下，合成新的DNA鏈
。
（4）研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲得一只轉(zhuǎn)基因雜合鼠F₀，并確認(rèn)突變基因已經(jīng)穩(wěn)定同源替代IKK基因，請(qǐng)你設(shè)計(jì)完成獲得SCID模型鼠的實(shí)驗(yàn)步驟：
①雜交親本：
F₀與野生鼠
F₀與野生鼠
，雜交得F₁；
②F₁雌、雄鼠隨機(jī)交配得F₂；
③提取F₂每只小鼠的基因組DNA，采用分子生物學(xué)方法，利用IKK基因探針和突變基因探針進(jìn)行篩選，則
IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶，突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶，突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
的為模型鼠。

【答案】Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）；引物A和引物B；引物C；②；使4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶作用下，合成新的DNA鏈；F₀與野生鼠；IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶，突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/6/11 8:0:9組卷：7引用：2難度：0.4

相似題

1．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進(jìn)行生物體外復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)。請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題：
（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的半保留復(fù)制過(guò)程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長(zhǎng)的分子，可推測(cè)參與以上過(guò)程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過(guò)程中無(wú)岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的復(fù)制過(guò)程特點(diǎn)是

，PCR過(guò)程的特點(diǎn)是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過(guò)PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長(zhǎng)度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進(jìn)行電泳分離可得到

種不同長(zhǎng)度的子鏈 DNA片段。為使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增示意圖。

催化①過(guò)程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個(gè)堿基，其中C有15個(gè)，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經(jīng)過(guò)以上若干過(guò)程后共獲得8個(gè)雙鏈 DNA，此過(guò)程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為

（以上過(guò)程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析

2．在新冠病毒的核酸檢測(cè)過(guò)程中采用的逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR），是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的廣泛應(yīng)用。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA，再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增，進(jìn)而獲得檢測(cè)的目的基因S。下列關(guān)于RT-PCR的敘述錯(cuò)誤的是（　?。?/h2>

A．RT-PCR所用的酶包括逆轉(zhuǎn)錄酶和熱穩(wěn)定RNA聚合酶

B．RT-PCR所用的兩引物序列不同，兩者間可進(jìn)行互補(bǔ)配對(duì)

C．RT-PCR過(guò)程中需添加ATP，反應(yīng)過(guò)程中會(huì)有磷酸鍵斷裂

D．至少經(jīng)過(guò)2次循環(huán)，方可獲取與目的基因等長(zhǎng)的DNA單鏈

發(fā)布：2024/10/31 0:0:1組卷：4引用：1難度：0.6

解析

3．原位PCR技術(shù)是利用原位PCR儀，在組織或細(xì)胞中靶DNA所在的位置上進(jìn)行的PCR循環(huán)擴(kuò)增，通過(guò)摻入標(biāo)記基因直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法。進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)體系中的反應(yīng)成分需滲透到組織或細(xì)胞的靶DNA處才能進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系中需要添加一定濃度的Mg²⁺，而組織細(xì)胞間的物質(zhì)會(huì)吸附Mg²⁺，使進(jìn)入細(xì)胞的Mg²⁺減少。下列說(shuō)法正確的是（　?。?/h2>

A．PCR技術(shù)中復(fù)性是當(dāng)溫度下降到65℃時(shí)，兩種引物與兩條DNA單鏈結(jié)合的過(guò)程

B．反應(yīng)體系中dNTP作為擴(kuò)增的原料，會(huì)依次連接到子鏈的5′端

C．反應(yīng)體系中引物的G，C堿基含量越高越好，因?yàn)樵礁咭锝Y(jié)合的特異性越強(qiáng)

D．原位PCR反應(yīng)體系中使用的Mg²⁺濃度要比常規(guī)PCR高

發(fā)布：2024/10/31 21:0:2組卷：10引用：3難度：0.7

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引物A	5'-CCCAACCGGAAAGTGTCA-3' （下劃線字母為突變堿基）
引物B	5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3' （下劃線部分為限制酶HindⅢ識(shí)別序列）
引物C	5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3' （下劃線部分為限制酶SacⅠ識(shí)別序列）