真核細(xì)胞基因起始轉(zhuǎn)錄需要有轉(zhuǎn)錄因子的參與。酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子GAL4是組件式蛋白質(zhì)，由DNA結(jié)合功能域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD）組成，兩個(gè)結(jié)構(gòu)域分開時(shí)不能激活轉(zhuǎn)錄。如果將待測蛋白質(zhì)X與BD融合，蛋白質(zhì)Y與AD融合，蛋白質(zhì)X和Y有相互作用時(shí)，兩結(jié)構(gòu)域能重新呈現(xiàn)完整轉(zhuǎn)錄因子活性，并可激活報(bào)告基因啟動子，研究人員為了驗(yàn)證蛋白質(zhì)X和Y具有相互作用，分別構(gòu)建了不同的表達(dá)載體進(jìn)行如圖1實(shí)驗(yàn)。
（1）研究小組采用了如圖2巢式PCR技術(shù)獲取蛋白質(zhì)X和Y基因的編碼區(qū)序列，技術(shù)原理是利用兩套PCR引物進(jìn)行兩輪PCR擴(kuò)增，首先利用第一對引物（外引物）對目的基因所在DNA進(jìn)行擴(kuò)增；第二輪擴(kuò)增以第一輪擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，利用第二對引物（內(nèi)引物或巢式引物）進(jìn)行擴(kuò)增。常規(guī)PCR可能產(chǎn)生錯(cuò)誤的目標(biāo)產(chǎn)物，相比于常規(guī)PCR，巢式PCR獲得錯(cuò)誤目標(biāo)產(chǎn)物概率低的原因是
如果利用外引物擴(kuò)增產(chǎn)生了錯(cuò)誤片段，再利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯(cuò)誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率低
如果利用外引物擴(kuò)增產(chǎn)生了錯(cuò)誤片段，再利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯(cuò)誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率低
。巢式PCR擴(kuò)增蛋白質(zhì)Y編碼區(qū)序列時(shí)需在兩個(gè) 內(nèi)
內(nèi)
（填寫“內(nèi)”、“外”或“內(nèi)和外”）引物的5'端分別添加序列 GAATTC和 CTCGAG
GAATTC和 CTCGAG
。
（2）為篩選鑒定兩種表達(dá)載體成功導(dǎo)入的營養(yǎng)缺陷型酵母菌，培養(yǎng)基中需添加物質(zhì)有 ade
ade
（用下列字母填寫）。
a.氨芐青霉素
b.色氨酸
c.組氨酸
d.瓊脂
e.無機(jī)鹽
（3）LacZ基因編碼產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色；否則菌落為白色。請依據(jù)上述原理，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證蛋白質(zhì)X和Y具有相互作用，寫出實(shí)驗(yàn)思路并預(yù)期結(jié)果與結(jié)論。
①實(shí)驗(yàn)思路：將插入 X、Y 基因的兩種表達(dá)載體，未插入X 基因的兩種表達(dá)載體，未插入Y基因的兩種表達(dá)載體，分別導(dǎo)入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌細(xì)胞，在添加X-gal的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察菌落顏色
將插入 X、Y 基因的兩種表達(dá)載體，未插入X 基因的兩種表達(dá)載體，未插入Y基因的兩種表達(dá)載體，分別導(dǎo)入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌細(xì)胞，在添加X-gal的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察菌落顏色
。
②實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論：只有導(dǎo)入含 X、Y 基因的兩種表達(dá)載體的一組培養(yǎng)基上出現(xiàn)藍(lán)色菌落，說明蛋白質(zhì)X和Y具有相互作用
只有導(dǎo)入含 X、Y 基因的兩種表達(dá)載體的一組培養(yǎng)基上出現(xiàn)藍(lán)色菌落，說明蛋白質(zhì)X和Y具有相互作用
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