真核細胞基因起始轉錄需要有轉錄因子的參與。酵母細胞轉錄因子GAL4是組件式蛋白質，由DNA結合功能域（BD）和轉錄激活結構域（AD）組成，兩個結構域分開時不能激活轉錄。如果將待測蛋白質X與BD融合，蛋白質Y與AD融合，蛋白質X和Y有相互作用時，兩結構域能重新呈現(xiàn)完整轉錄因子活性，并可激活報告基因啟動子，研究人員為了驗證蛋白質X和Y具有相互作用，分別構建了不同的表達載體進行如圖1實驗。

（1）研究小組采用了如圖2巢式PCR技術獲取蛋白質X和Y基因的編碼區(qū)序列，技術原理是利用兩套PCR引物進行兩輪PCR擴增，首先利用第一對引物（外引物）對目的基因所在DNA進行擴增；第二輪擴增以第一輪擴增產物為模板，利用第二對引物（內引物或巢式引物）進行擴增。常規(guī)PCR可能產生錯誤的目標產物，相比于常規(guī)PCR，巢式PCR獲得錯誤目標產物概率低的原因是

如果利用外引物擴增產生了錯誤片段，再利用內引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低

如果利用外引物擴增產生了錯誤片段，再利用內引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低

。巢式PCR擴增蛋白質Y編碼區(qū)序列時需在兩個

內

內

（填寫“內”、“外”或“內和外”）引物的5'端分別添加序列

GAATTC和 CTCGAG

GAATTC和 CTCGAG

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（2）為篩選鑒定兩種表達載體成功導入的營養(yǎng)缺陷型酵母菌，培養(yǎng)基中需添加物質有

ade

ade

（用下列字母填寫）。
a.氨芐青霉素
b.色氨酸
c.組氨酸
d.瓊脂
e.無機鹽
（3）LacZ基因編碼產生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal產生藍色物質，使菌落呈現(xiàn)藍色；否則菌落為白色。請依據上述原理，設計實驗驗證蛋白質X和Y具有相互作用，寫出實驗思路并預期結果與結論。
①實驗思路：

將插入 X、Y 基因的兩種表達載體，未插入X 基因的兩種表達載體，未插入Y基因的兩種表達載體，分別導入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌細胞，在添加X-gal的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察菌落顏色

將插入 X、Y 基因的兩種表達載體，未插入X 基因的兩種表達載體，未插入Y基因的兩種表達載體，分別導入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌細胞，在添加X-gal的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察菌落顏色

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②實驗結果及結論：

只有導入含 X、Y 基因的兩種表達載體的一組培養(yǎng)基上出現(xiàn)藍色菌落，說明蛋白質X和Y具有相互作用

只有導入含 X、Y 基因的兩種表達載體的一組培養(yǎng)基上出現(xiàn)藍色菌落，說明蛋白質X和Y具有相互作用

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