新冠病毒核酸檢測的原理為實時熒光定量PCR(qPCR)檢測法,技術(shù)流程如圖所示,在PCR擴增時加入能與目的基因(新冠病毒的N基因)結(jié)合的熒光探針,①②③表示相關(guān)步驟?;卮鹣铝袉栴}:
(1)qPCR過程中,需先以RNA為模板合成cDNA,故裝置中需添加酶 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶。為確保新冠病毒核酸檢測的準確性,在設(shè)計PCR引物時必須依據(jù)新冠病毒RNA中的 特異性核苷酸序列特異性核苷酸序列來進行。PCR過程每次循環(huán)分為3步,其中溫度最低的一步是 復性復性。
(2)根據(jù)熒光探針功能分析,熒光探針中堿基序列的設(shè)計應(yīng)主要依據(jù)。在配制PCR擴增液時,加入的熒光探針序列為5'-TTGCT……AGATT-3',如果模板中存在N基因序列,與探針結(jié)合的序列應(yīng)該是5'-新冠病毒的N基因的堿基序列—AATCT……AGCAA—新冠病毒的N基因的堿基序列—AATCT……AGCAA—-3'。如果某人沒有感染新冠病毒,則進行PCR時DNA實時熒光信號強度 不變不變(填“增強”“減弱”或“不變”)。
(3)還可對新冠病毒進行免疫學檢測,向小鼠體內(nèi)注射新冠病毒S蛋白(決定病毒入侵易感細胞的關(guān)鍵蛋白)后分離產(chǎn)生的B淋巴細胞,并與小鼠的骨髓瘤細胞融合,常用的融合方法有 PEG融合/滅活病毒誘導融合法PEG融合/滅活病毒誘導融合法(答出1種);再經(jīng)多次篩選、檢測,獲得雜交瘤細胞,該種細胞的特點是 既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生與S蛋白特異性結(jié)合的專一抗體既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生與S蛋白特異性結(jié)合的專一抗體。在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng),獲得大量可與S蛋白特異性結(jié)合的單克隆抗體作為診斷試劑。
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶;特異性核苷酸序列;復性;新冠病毒的N基因的堿基序列—AATCT……AGCAA—;不變;PEG融合/滅活病毒誘導融合法;既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生與S蛋白特異性結(jié)合的專一抗體
【解答】
【點評】
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