硝基苯酚是工業(yè)污水中重要污染物，某研究小組欲從污水處理廠污泥中分離分解硝基苯酚的細(xì)菌。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：
（1）為了篩選污泥中可分解硝基苯酚的細(xì)菌，所用的選擇培養(yǎng)基只能以

硝基苯酚

硝基苯酚

作為唯一碳源。配制培養(yǎng)基時(shí)除需提供碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、

pH以及氧氣

pH以及氧氣

的要求。
（2）純化菌株時(shí)，可采用平板劃線法進(jìn)行接種。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有

①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始

①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始

。（答出兩點(diǎn)原因）
（3）若接種過(guò)程和培養(yǎng)過(guò)程均符合要求，結(jié)果卻在培養(yǎng)基上觀察到了不同形態(tài)的菌落（不考慮分解硝基苯酚的細(xì)菌存在多種變異類型），則產(chǎn)生這種現(xiàn)象的可能原因是：

培養(yǎng)基的配制不符合要求（培養(yǎng)基中還含有其他有機(jī)碳源）

培養(yǎng)基的配制不符合要求（培養(yǎng)基中還含有其他有機(jī)碳源）

；若培養(yǎng)基的配制、接種及培養(yǎng)等過(guò)程的操作均規(guī)范無(wú)誤，則這些細(xì)菌所利用的碳源可能是

空氣中的CO₂

空氣中的CO₂

，其代謝類型（同化作用）是

自養(yǎng)型

自養(yǎng)型

。
（4）若要對(duì)分解硝基苯酚的細(xì)菌菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，接種時(shí)，應(yīng)采用的方法是

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)，原因是

樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌

樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌

。進(jìn)行菌落數(shù)量統(tǒng)計(jì)時(shí)，要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止

因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目

因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目

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