普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（GhMmaA2），能在纖維細(xì)胞中特異性表達(dá)，產(chǎn)生的β甘露糖苷酶催化半纖維素降解．棉纖維長度變短?？蒲腥藛T通過構(gòu)建反義GhMnaA2基因表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入棉花細(xì)胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過程如圖：
（1）基因表達(dá)載體除圖示組成外，還有復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因終止子、標(biāo)記基因等（答兩個）。①②過程中所用的限制酶分別是 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ和 SmaⅠSmaⅠ。
（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）原理是 DNA復(fù)制DNA復(fù)制，該過程需要根據(jù)GhMnaA2基因設(shè)計(jì) 22種引物，為保證 GhMnaA2插入到質(zhì)粒2中，需在引物的 5′5′端添加限制酶識別序列。
（3）③過程中用酶切法可鑒定正、反義基因表達(dá)載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切割正義基因表達(dá)載體獲得0.1kb、3.75kb、5.25kb、8.6kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長度應(yīng)是 5.35kb5.35kb和 12.35kb12.35kb。
（4）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維更長的原理是 由于反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)（翻譯），故導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維更長由于反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)（翻譯），故導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維更長。
（5）為什么不能用GhMnaA2探針進(jìn)行DNA分子雜交來鑒定基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞？因?yàn)槊藁?xì)胞中本來就有GhMna2，不管是否導(dǎo)入都能與該探針發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，故不能用GhMnaA2探針進(jìn)行DNA分子雜交來鑒定基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞因?yàn)槊藁?xì)胞中本來就有GhMna2，不管是否導(dǎo)入都能與該探針發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，故不能用GhMnaA2探針進(jìn)行DNA分子雜交來鑒定基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】終止子、標(biāo)記基因；HindⅢ和BamHⅠ；SmaⅠ；DNA復(fù)制；2；5′；5.35kb；12.35kb；由于反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)（翻譯），故導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維更長；因?yàn)槊藁?xì)胞中本來就有GhMna2，不管是否導(dǎo)入都能與該探針發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，故不能用GhMnaA2探針進(jìn)行DNA分子雜交來鑒定基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：66引用：1難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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