Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞?？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的

細(xì)胞核

細(xì)胞核

。
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到

囊胚

囊胚

期時(shí)，可從

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

分離出ES細(xì)胞。
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有基因Rag₂的表達(dá)載體?？梢岳?!--BA-->

PCR技術(shù)

PCR技術(shù)

擴(kuò)增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有

HindⅢ

HindⅢ

和

PstⅠ

PstⅠ

的酶切位點(diǎn)。
（4）為檢測(cè)Rag₂基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

，用

抗Rag₂蛋白的抗體

抗Rag₂蛋白的抗體

進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。