赤霉素與其受體GID結(jié)合后，可以促進植物莖稈伸長。藍光能夠激活藍光受體CRY，抑制赤霉素的作用，為探究該機理，研究者分別構(gòu)建了含有His-CRY和1GST-GID融合基因的表達載體，表達出相應的融合蛋白。His和GST均為短肽，它們與其他蛋白形成的融合蛋白能與His或CST抗體結(jié)合，且不影響其他蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。
（1）構(gòu)建含上述融合基因的表達載體。
①結(jié)合圖1分析，欲使His短肽連在CRY的氨基酸序列前面（氨基端），則應在 F引物F引物（填“F引物”或“R引物”）的 5’5’（填“5′”或“3′”）端加上His短肽的編碼序列，理由是 要將His短肽加在CRY的氨基端，則應在CRY基因模板鏈的3’端上加His短肽編碼序列，對應的是F引物；而且加上的His序列不與CRY轉(zhuǎn)錄模板配對，所以只能加在F引物5’端，才能保證引物與模板配對后可以正常延伸要將His短肽加在CRY的氨基端，則應在CRY基因模板鏈的3’端上加His短肽編碼序列，對應的是F引物；而且加上的His序列不與CRY轉(zhuǎn)錄模板配對，所以只能加在F引物5’端，才能保證引物與模板配對后可以正常延伸。
②為使融合基因能與載體相連接，還需在F引物和R引物上添加相應的酶切位點序列，該序列應該位于His短肽編碼序列的 5’5’（填“5′”或“3′”）端。
③用同樣的方法擴增GST-GID融合基因，并構(gòu)建相關(guān)表達載體。
（2）將兩個表達載體同時導入擬南芥細胞，一段時間后裂解細胞，將含有His抗體的磁珠加入裂解液中，充分孵育后收集磁珠，將磁珠上的蛋白（磁珠蛋白）分離下來，進行抗原—抗體雜交，結(jié)果如圖2。
①對細胞裂解液蛋白進行抗原—抗體雜交的目的是 確定His-CRY和GST-GID這兩個融合基因在擬南芥細胞中已正常表達確定His-CRY和GST-GID這兩個融合基因在擬南芥細胞中已正常表達。對磁珠蛋白進行His抗體檢測的目的是 確定磁珠上的His抗體可以結(jié)合His短肽確定磁珠上的His抗體可以結(jié)合His短肽。
②圖示結(jié)果說明，藍光的作用機理是 光激活CRY后，CRY與赤霉素受體GID結(jié)合，使赤霉素無法發(fā)揮作用，從而抑制赤霉素的作用光激活CRY后，CRY與赤霉素受體GID結(jié)合，使赤霉素無法發(fā)揮作用，從而抑制赤霉素的作用。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】F引物；5’；要將His短肽加在CRY的氨基端，則應在CRY基因模板鏈的3’端上加His短肽編碼序列，對應的是F引物；而且加上的His序列不與CRY轉(zhuǎn)錄模板配對，所以只能加在F引物5’端，才能保證引物與模板配對后可以正常延伸；5’；確定His-CRY和GST-GID這兩個融合基因在擬南芥細胞中已正常表達；確定磁珠上的His抗體可以結(jié)合His短肽；光激活CRY后，CRY與赤霉素受體GID結(jié)合，使赤霉素無法發(fā)揮作用，從而抑制赤霉素的作用
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/12/4 17:0:2組卷：24引用：1難度：0.6
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