赤霉素與其受體GID結(jié)合后，可以促進(jìn)植物莖稈伸長(zhǎng)。藍(lán)光能夠激活藍(lán)光受體CRY，抑制赤霉素的作用，為探究該機(jī)理，研究者分別構(gòu)建了含有His-CRY和1GST-GID融合基因的表達(dá)載體，表達(dá)出相應(yīng)的融合蛋白。His和GST均為短肽，它們與其他蛋白形成的融合蛋白能與His或CST抗體結(jié)合，且不影響其他蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。
（1）構(gòu)建含上述融合基因的表達(dá)載體。
①結(jié)合圖1分析，欲使His短肽連在CRY的氨基酸序列前面（氨基端），則應(yīng)在
F引物
F引物
（填“F引物”或“R引物”）的 5’
5’
（填“5′”或“3′”）端加上His短肽的編碼序列，理由是 要將His短肽加在CRY的氨基端，則應(yīng)在CRY基因模板鏈的3’端上加His短肽編碼序列，對(duì)應(yīng)的是F引物；而且加上的His序列不與CRY轉(zhuǎn)錄模板配對(duì)，所以只能加在F引物5’端，才能保證引物與模板配對(duì)后可以正常延伸
要將His短肽加在CRY的氨基端，則應(yīng)在CRY基因模板鏈的3’端上加His短肽編碼序列，對(duì)應(yīng)的是F引物；而且加上的His序列不與CRY轉(zhuǎn)錄模板配對(duì)，所以只能加在F引物5’端，才能保證引物與模板配對(duì)后可以正常延伸
。
②為使融合基因能與載體相連接，還需在F引物和R引物上添加相應(yīng)的酶切位點(diǎn)序列，該序列應(yīng)該位于His短肽編碼序列的 5’
5’
（填“5′”或“3′”）端。
③用同樣的方法擴(kuò)增GST-GID融合基因，并構(gòu)建相關(guān)表達(dá)載體。
（2）將兩個(gè)表達(dá)載體同時(shí)導(dǎo)入擬南芥細(xì)胞，一段時(shí)間后裂解細(xì)胞，將含有His抗體的磁珠加入裂解液中，充分孵育后收集磁珠，將磁珠上的蛋白（磁珠蛋白）分離下來(lái)，進(jìn)行抗原—抗體雜交，結(jié)果如圖2。
①對(duì)細(xì)胞裂解液蛋白進(jìn)行抗原—抗體雜交的目的是 確定His-CRY和GST-GID這兩個(gè)融合基因在擬南芥細(xì)胞中已正常表達(dá)
確定His-CRY和GST-GID這兩個(gè)融合基因在擬南芥細(xì)胞中已正常表達(dá)
。對(duì)磁珠蛋白進(jìn)行His抗體檢測(cè)的目的是 確定磁珠上的His抗體可以結(jié)合His短肽
確定磁珠上的His抗體可以結(jié)合His短肽
。
②圖示結(jié)果說(shuō)明，藍(lán)光的作用機(jī)理是 光激活CRY后，CRY與赤霉素受體GID結(jié)合，使赤霉素?zé)o法發(fā)揮作用，從而抑制赤霉素的作用
光激活CRY后，CRY與赤霉素受體GID結(jié)合，使赤霉素?zé)o法發(fā)揮作用，從而抑制赤霉素的作用
。
