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重組人纖溶酶原激活劑(hPA)能夠高效特異性地溶解血栓,目前已培育成功rhPA轉(zhuǎn)基因兔,作為乳腺生物反應(yīng)器批量生產(chǎn)藥物。某科研團(tuán)隊構(gòu)建的PCL25/hPA重組質(zhì)粒如圖1所示(該質(zhì)粒以β-casein作為調(diào)控序列,以CMV為啟動子,圖1中SadⅠ、XhoⅠ、NotⅠ所在位置表示相關(guān)限制酶切點),圖2為培育rhPA轉(zhuǎn)基因兔時用的乳腺特異性表達(dá)載體及PCR檢測原理圖(PCR-F、PCR-R為引物序列)。請回答下列問題:
菁優(yōu)網(wǎng)
(1)據(jù)圖1推測,PCL25/rhPA重組質(zhì)粒是在PCL25質(zhì)粒的
XhoⅠ
XhoⅠ
限制酶切位點處插入化學(xué)合成的rhPAcDNA片段構(gòu)建而成。rhPA基因上游的CMV能被
RNA聚合酶
RNA聚合酶
識別并結(jié)合,從而開啟轉(zhuǎn)錄過程。
(2)為獲得圖2的乳腺特異性表達(dá)載體需用
SalⅠ和NotⅠ
SalⅠ和NotⅠ
切割PCL25/rhPA重組質(zhì)粒使之線性化。PCR-F和PCR-R設(shè)計時依據(jù)的是
CMV和rhPA基因的部分脫氧核苷酸序列
CMV和rhPA基因的部分脫氧核苷酸序列
序列。
(3)對實驗得到的1~6號仔兔進(jìn)行PCR及產(chǎn)物檢測,得到圖3所示結(jié)果,則成功導(dǎo)入rhPA基因的仔兔有
2、3、5、6
2、3、5、6
。(注:M道條帶可作為雙鏈線狀DNA分子量大小的參照,7道為顯微注射片段PCR擴(kuò)增產(chǎn)物作陽性對照)
(4)生長激素(GH)可促進(jìn)動物細(xì)胞增殖和乳腺生長發(fā)育及維持泌乳。研究人員將GH基因?qū)雛hPA單轉(zhuǎn)基因兔體內(nèi),獲得rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔,以期提高兔乳清中的rhPA表達(dá)量。
①完成下列表格:
實驗?zāi)康?/td> 簡要操作過程
顯微注射用基因片段的準(zhǔn)備 將PCL25/GH質(zhì)粒雙酶切而線性化,電冰分離不同大小分子量的基因片段,回收真核基因片段待用
對兔進(jìn)行
超數(shù)排卵
超數(shù)排卵
和同期發(fā)情處理
選取3只未發(fā)情的rhPA單轉(zhuǎn)基因兔作為供體(標(biāo)號a、b、c),適量注射FSH/hCG(兩種促性腺激素),與正常公兔配種,在母兔的
輸卵管
輸卵管
(填部位)形成受精卵。在供體兔配種的同時,選取成年健康新西蘭母兔作為受體,耳緣靜脈注射適量hCG。
雙轉(zhuǎn)基因兔的制備 將顯微注射基因片段導(dǎo)入受精卵的原核內(nèi),適宜條件培養(yǎng),胚胎移植。
轉(zhuǎn)基因兔的整合篩選 無菌剪取新生仔兔的耳尖組織少許,提取基因組。針對rhPA和GH兩種基因,設(shè)計
2
2
對引物進(jìn)行PCR檢測。PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳,確定條帶大小是否正確。
rhPA含量測定 分別測定
rhPA單轉(zhuǎn)基因兔和rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔
rhPA單轉(zhuǎn)基因兔和rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔
乳清中的rhPA的表達(dá)量。
②分析實驗結(jié)果
樣本 供體兔a 供體兔b 供體兔c
rhPA表達(dá)水平(μg?mL-1 42.2 42.8 15.2
樣本 雙轉(zhuǎn)基因兔a1 雙轉(zhuǎn)基因兔a2 雙轉(zhuǎn)基因兔b1 雙轉(zhuǎn)基因兔c1
rhPA表達(dá)水平(μg?mL-1 432 444 636 248
(注:雙轉(zhuǎn)基因兔a1、2親本來源為供體兔a,雙轉(zhuǎn)基因兔b1親本來源為供體兔b,雙轉(zhuǎn)基因兔c1親本來源為供體兔c)
實驗結(jié)果表明,
rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔乳腺表達(dá)rhPA水平明顯高于rhPA單轉(zhuǎn)基因兔,GH可協(xié)同促進(jìn)rhPA在轉(zhuǎn)基因兔乳腺中的高效表達(dá)
rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔乳腺表達(dá)rhPA水平明顯高于rhPA單轉(zhuǎn)基因兔,GH可協(xié)同促進(jìn)rhPA在轉(zhuǎn)基因兔乳腺中的高效表達(dá)

【答案】XhoⅠ;RNA聚合酶;SalⅠ和NotⅠ;CMV和rhPA基因的部分脫氧核苷酸序列;2、3、5、6;超數(shù)排卵;輸卵管;2;rhPA單轉(zhuǎn)基因兔和rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔;rhPA/GH雙轉(zhuǎn)基因兔乳腺表達(dá)rhPA水平明顯高于rhPA單轉(zhuǎn)基因兔,GH可協(xié)同促進(jìn)rhPA在轉(zhuǎn)基因兔乳腺中的高效表達(dá)
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:28引用:3難度:0.6
相似題
  • 1.目前,科學(xué)家已在牛和山羊等動物乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白等多種蛋白類藥物.下列與之相關(guān)的說法,正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:5引用:1難度:0.9
  • 2.最近,科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠,其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并將其分泌到尿液中.這是繼哺乳動物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后,在膀胱生物反應(yīng)器研究上另一進(jìn)展.
    (1)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫荏w細(xì)胞,常用的方法是
     
    .所使用到儀器是
     

    (2)在基因工程中,將目的基因與運載體結(jié)合時,必須用
     
    酶和
     
    酶.常用的運載體有
     
    、
     
    、
     
    等,而作為運載體必須具備相應(yīng)的條件,例如應(yīng)具有
     
    以便進(jìn)行篩選.進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時,通常要將外源基因轉(zhuǎn)入動物的
     
    中,原因是
     

    (3)通常采用
     
    技術(shù)檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組中.
    (4)在研究膀胱生物反應(yīng)器時,應(yīng)使外源基因在小鼠的
     
    細(xì)胞中特異性表達(dá).
    (5)如果將藥物蛋白基因轉(zhuǎn)入動物如牛、羊的膀胱上皮細(xì)胞中,從轉(zhuǎn)基因牛、羊尿液中提取藥物比從乳汁中提取藥物的更大優(yōu)越性在于
     

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:3引用:1難度:0.3
  • 3.抗凝血酶是一種天然抗凝血劑,在臨床上被廣泛應(yīng)用。目前科學(xué)家已在豬和羊等動物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了人的抗凝血酶,如圖是構(gòu)建抗凝血酶基因表達(dá)載體所用的pBR質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及人抗凝血酶基因所在的DNA片段,回答下列問題:
    菁優(yōu)網(wǎng)
    (1)現(xiàn)有以下4種引物,引物A15'-GGACCCCGGG-3';引物B:5'-CATTTCTAGA-3';引物C:5'-CCTGGGGCCC-3';引物D:5'-GTAAAGATCT-3';,利用PCR擴(kuò)增獲取抗凝血酶基因,應(yīng)選用引物
     
    (填引物名稱),擴(kuò)增產(chǎn)物可選擇限制酶
     
    切割后再利用E?coliDNA連接酶連接到pBR質(zhì)粒上。
    (2)所選用的pBR質(zhì)粒上含有啟動子,其作用是
     
    ,將構(gòu)建的基因表達(dá)載體先導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞,然后將大腸桿菌涂布到含新霉素的選擇培養(yǎng)基上,長出了多個大腸桿菌菌落,這些菌落并非都是目的菌株,原因是
     
    。
    (3)將篩選得到的目的菌株提取質(zhì)粒,再通過
     
    方法導(dǎo)入到豬或羊的
     
    細(xì)胞內(nèi),通過培養(yǎng)即可獲得能表達(dá)人抗凝血酶的乳腺生物反應(yīng)器。

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:4引用:1難度:0.6
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