番茄幼苗抗寒能力弱，為提高番茄植株的抗寒性，科學(xué)家利用基因工程將耐寒蛋白基因（LEA基因）導(dǎo)入番茄細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)基因植株。如圖為Ti質(zhì)粒和LEA基因的酶切位點(diǎn)，其中酶A、B、C均為限制性內(nèi)切核酸酶。回答下列有關(guān)基因工程的問題：

（1）獲取LEA基因的方法有

PCR技術(shù)、人工合成法和構(gòu)建基因文庫

PCR技術(shù)、人工合成法和構(gòu)建基因文庫

（答出兩種）。將Ti質(zhì)粒和LEA基因構(gòu)建成基因表達(dá)載體需要利用酶

B和酶C

B和酶C

切割DNA，目的是

保證LEA基因插入T-DNA中并整合到番茄細(xì)胞染色體的DNA上；防止Ti質(zhì)粒和LEA基因自身環(huán)化；防止目的基因反向連接

保證LEA基因插入T-DNA中并整合到番茄細(xì)胞染色體的DNA上；防止Ti質(zhì)粒和LEA基因自身環(huán)化；防止目的基因反向連接

（答出兩點(diǎn)）。
（2）Ti質(zhì)粒中的氨芐青霉素抗性基因的作用是

篩選出含有目的基因（LEA基因）的重組質(zhì)粒

篩選出含有目的基因（LEA基因）的重組質(zhì)粒

。構(gòu)建好的基因表達(dá)載體導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌前，需要用含Ca²⁺的溶液處理土壤農(nóng)桿菌，目的是

使土壤農(nóng)桿菌處于一種易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)

使土壤農(nóng)桿菌處于一種易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)

。
（3）將導(dǎo)入基因表達(dá)載體的土壤農(nóng)桿菌與番茄根尖或莖尖制成的愈傷組織混合培養(yǎng)，最終可獲得番茄植株，該過程利用了

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

技術(shù)。為確保獲得的番茄植株是抗寒性較強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因番茄植株，可在分子水平上進(jìn)行

抗原一抗體雜交

抗原一抗體雜交

，檢測(cè)LEA基因是否翻譯成耐寒蛋白，也可對(duì)獲得的番茄植株進(jìn)行耐寒性實(shí)驗(yàn)。