神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，是血管內(nèi)皮生長因子的新型受體，通過參與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成。研究人員從腫瘤細(xì)胞中擴增出NRP-1基因并將其導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，分離提純相應(yīng)NRP-1，并將其免疫小鼠，為靶向治療乳腺癌（MCF7）提供抗NRP-1的單克隆抗體（NRP-1MAb）。

（1）利用PCR技術(shù)可以從腫瘤細(xì)胞的基因組中分離擴增得到完整的NRP-1基因，其原因是使用

與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合

與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合

的引物可以從模板DNA中擴增出該基因。該技術(shù)可用于基因工程四個基本步驟中的

獲取目的基因和目的基因的檢測與鑒定

獲取目的基因和目的基因的檢測與鑒定

步驟。
（2）NRP-1基因表達(dá)載體的構(gòu)建如圖1所示。表達(dá)載體上除了標(biāo)注的DNA片段外，在NRP-1基因上游還必須擁有的DNA片段（箭頭所示）是

啟動子

啟動子

，其作用是

RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，啟動轉(zhuǎn)錄

RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，啟動轉(zhuǎn)錄

。
（3）研究人員將分離提純的NRP-1免疫小鼠后，取其脾臟中B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上不能存活的是

未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞

未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞

。選取檢測抗體陽性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時需要的氣體環(huán)境是

95%的空氣和5%的CO₂

95%的空氣和5%的CO₂

。
（4）研究發(fā)現(xiàn)，NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)。將MCF7細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種后3天開始給藥NRP-1MAb（低劑量lmg/kg；中劑量5mg/kg；高劑量10mg/kg），共給藥7次。每隔5天測算一次腫瘤的體積，如圖2所示。分析圖2可得出的結(jié)論是

NRP-1MAb能有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著

NRP-1MAb能有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著

。
（5）由題中信息推測NRP-1Mab抑制腫瘤的作用機理是：NRP-1Mab與NRP-1特異性結(jié)合，阻斷了

血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合

血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合

，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積。