神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，是血管內(nèi)皮生長因子的新型受體，通過參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成。研究人員從腫瘤細(xì)胞中擴(kuò)增出NRP-1基因并將其導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，分離提純相應(yīng)NRP-1，并將其免疫小鼠，為靶向治療乳腺癌（MCF7）提供抗NRP-1的單克隆抗體（NRP-1MAb）。
（1）利用PCR技術(shù)可以從腫瘤細(xì)胞的基因組中分離擴(kuò)增得到完整的NRP-1基因，其原因是使用與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合的引物可以從模板DNA中擴(kuò)增出該基因。該技術(shù)可用于基因工程四個(gè)基本步驟中的獲取目的基因和目的基因的檢測與鑒定獲取目的基因和目的基因的檢測與鑒定步驟。
（2）NRP-1基因表達(dá)載體的構(gòu)建如圖1所示。表達(dá)載體上除了標(biāo)注的DNA片段外，在NRP-1基因上游還必須擁有的DNA片段（箭頭所示）是啟動(dòng)子啟動(dòng)子，其作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。
（3）研究人員將分離提純的NRP-1免疫小鼠后，取其脾臟中B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上不能存活的是未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞。選取檢測抗體陽性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)需要的氣體環(huán)境是95%的空氣和5%的CO295%的空氣和5%的CO2。
（4）研究發(fā)現(xiàn)，NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)。將MCF7細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種后3天開始給藥NRP-1MAb（低劑量lmg/kg；中劑量5mg/kg；高劑量10mg/kg），共給藥7次。每隔5天測算一次腫瘤的體積，如圖2所示。分析圖2可得出的結(jié)論是NRP-1MAb能有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著NRP-1MAb能有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著。
（5）由題中信息推測NRP-1Mab抑制腫瘤的作用機(jī)理是：NRP-1Mab與NRP-1特異性結(jié)合，阻斷了血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件與過程．
【答案】與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合；獲取目的基因和目的基因的檢測與鑒定；啟動(dòng)子；RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄；未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞；95%的空氣和5%的CO2；NRP-1MAb能有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著；血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/7/26 8:0:9組卷：14引用：4難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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