人血清白蛋白（HSA）在臨床上需求量很大，通常從人血液中提取，但提取量有限，因此科學(xué)家利用基因工程和胚胎工程等技術(shù)培育轉(zhuǎn)HSA基因牛，該種牛能生產(chǎn)含HSA的牛乳，如圖是培育流程圖，據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）圖中過(guò)程①需要用

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

 酶最終得到雙鏈DNA分子；該DNA分子往往需要經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增。為了能與酶切后的質(zhì)粒進(jìn)行連接，需要在擴(kuò)增前設(shè)計(jì)的引物上添加

限制性核酸內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)（酶切位點(diǎn)）

限制性核酸內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)（酶切位點(diǎn)）

。
（2）過(guò)程②是基因工程的核心步驟，為了提高該過(guò)程的連接成功率，除了要考慮溫度等環(huán)境因素外，還應(yīng)考慮

目的基因的濃度和質(zhì)量、質(zhì)粒的濃度和質(zhì)量、DNA連接酶的濃度和活性

目的基因的濃度和質(zhì)量、質(zhì)粒的濃度和質(zhì)量、DNA連接酶的濃度和活性

（至少寫(xiě)2點(diǎn)）因素。
（3）若過(guò)程③選用牛胚胎干細(xì)胞作為受體細(xì)胞，則過(guò)程④利用的技術(shù)有

核移植、胚胎體外培養(yǎng)

核移植、胚胎體外培養(yǎng)

，若將上述重組胚胎干細(xì)胞直接注入囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，

不一定

不一定

（填“一定不”、“不一定”或“一定”）能得到產(chǎn)生含HSA牛乳的轉(zhuǎn)基因牛，原因是

注入的重組胚胎干細(xì)胞不一定分裂、分化形成乳腺組織

注入的重組胚胎干細(xì)胞不一定分裂、分化形成乳腺組織

。
（4）若過(guò)程③選用受精卵作為受體細(xì)胞，則在進(jìn)行過(guò)程⑤之前，需要對(duì)早期胚胎細(xì)胞進(jìn)行DNA分析和

性別鑒定

性別鑒定

；若在轉(zhuǎn)基因母牛的牛乳中檢測(cè)到

HSA（或人血清白蛋白）

HSA（或人血清白蛋白）

，說(shuō)明HSA基因成功表達(dá)。