非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的一種急性傳染病,死亡率高達(dá)100%。為實(shí)現(xiàn)對(duì)該病毒快速、準(zhǔn)確的早期診斷,可用非洲豬瘟病毒p54蛋白的單克隆抗體作為診斷試劑。制備該單克隆抗體時(shí),需先利用大腸桿菌表達(dá)出ASFV的p54蛋白并進(jìn)行純化,然后利用純化的可溶性p54蛋白制備單克隆抗體。回答下列問(wèn)題:
(1)將純化的可溶性p54蛋白多次注射到小鼠體內(nèi)可獲得血清抗體,但是血清抗體的特異性差,原因是
血清中多種抗體混合在一起,識(shí)別多種抗原,導(dǎo)致特異性差
血清中多種抗體混合在一起,識(shí)別多種抗原,導(dǎo)致特異性差
;同時(shí)在小鼠的脾臟內(nèi)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的B細(xì)胞。誘導(dǎo)從小鼠脾臟中獲得的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合時(shí),可使用生物誘導(dǎo)劑滅活的病毒
滅活的病毒
促融。
(2)融合的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選才能獲得雜交瘤細(xì)胞,在此過(guò)程中需要進(jìn)行篩選的原因是細(xì)胞的融合是隨機(jī)的,反應(yīng)體系中含有未融合的細(xì)胞、融合的具有同種核型的細(xì)胞以及雜交瘤細(xì)胞
細(xì)胞的融合是隨機(jī)的,反應(yīng)體系中含有未融合的細(xì)胞、融合的具有同種核型的細(xì)胞以及雜交瘤細(xì)胞
;獲得的雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)
克隆化培養(yǎng)
和抗體檢測(cè)
抗體檢測(cè)
,經(jīng)多次篩選后,才能獲得大量能分泌抗p54蛋白的單克隆抗體的細(xì)胞株。
(3)為獲得大量抗p54蛋白的單克隆抗體,通常有兩種途徑:途徑一是將篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取。體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),為保持無(wú)毒無(wú)菌的環(huán)境,應(yīng)進(jìn)行的操作是對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理;在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液
對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理;在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液
(答三點(diǎn))。途徑二是將篩選獲得的雜瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔內(nèi)增殖,從小鼠腹水中
注入小鼠腹腔內(nèi)增殖,從小鼠腹水中
獲得。
(4)抗p54蛋白的單克隆抗體能快速、準(zhǔn)確地診斷出ASFV的原因是該單克隆抗體純度高、特異性強(qiáng),能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合
該單克隆抗體純度高、特異性強(qiáng),能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合
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