Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞?？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的

細(xì)胞核

細(xì)胞核

。小鼠體細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)，所需氣體主要是O₂和CO₂，其中CO₂的作用是維持培養(yǎng)液（基）的

pH值（或酸堿度）

pH值（或酸堿度）

。
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到

囊胚

囊胚

期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。體外培養(yǎng)條件下，ES細(xì)胞在

飼養(yǎng)層

飼養(yǎng)層

細(xì)胞上，能夠維持只增殖不分化的狀態(tài)。
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的表達(dá)載體。可以根據(jù)Rag₂基因的

核苷酸序列

核苷酸序列

設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有

HindⅢ和PstⅠ

HindⅢ和PstⅠ

酶的酶切位點(diǎn)。
（4）為檢測(cè)Rag₂基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

，用

抗Rag₂蛋白

抗Rag₂蛋白

的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。