?GFP是水母體內(nèi)存在的能發(fā)綠色熒光的一種蛋白??蒲腥藛T以GFP基因為材料,利用基因工程技術(shù)獲得了能發(fā)其他顏色熒光的蛋白,豐富了熒光蛋白的顏色種類?;卮鹣铝袉栴}。
(1)構(gòu)建突變基因文庫??蒲腥藛T將GFP基因的不同突變基因分別插入載體,并轉(zhuǎn)入大腸桿菌制備出GFP基因的突變基因文庫。通常,基因文庫是指 含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因。
(2)構(gòu)建目的基因表達載體。科研人員從構(gòu)建的GFP突變基因文庫中提取目的基因(均為突變基因)構(gòu)建表達載體,其模式圖如下所示(箭頭為GFP突變基因的轉(zhuǎn)錄方向)。圖中①為 終止子終止子,②為 啟動子啟動子,其作用是 RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNARNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA;圖中氨芐青霉素抗性基因是一種標記基因,其作用是 鑒別受體細胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細胞篩選出來鑒別受體細胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細胞篩選出來。
(3)目的基因的表達??蒲腥藛T將構(gòu)建好的表達載體導(dǎo)入大腸桿菌中進行表達,發(fā)現(xiàn)大腸桿菌有的發(fā)綠色熒光,有的發(fā)黃色熒光,有的不發(fā)熒光。請從密碼子特點的角度分析,發(fā)綠色熒光的可能原因是 密碼子的簡并性密碼子的簡并性(答出1點即可)。
(4)新蛋白與突變基因的關(guān)聯(lián)性分析。將上述發(fā)黃色熒光的大腸桿菌分離純化后,對其所含的GFP突變基因進行測序,發(fā)現(xiàn)其堿基序列與GFP基因的不同,將該GFP突變基因命名為YFP基因(黃色熒光蛋白基因)。若要通過基因工程的方法探究YFP基因能否在真核細胞中表達,實驗思路是 將含有YFP基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌中,看其能否發(fā)出黃色熒光將含有YFP基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌中,看其能否發(fā)出黃色熒光。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因;終止子;啟動子;RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA;鑒別受體細胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細胞篩選出來;密碼子的簡并性;將含有YFP基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌中,看其能否發(fā)出黃色熒光
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/8/9 8:0:9組卷:231引用:4難度:0.6
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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