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人血清白蛋白(HSA)主要在肝臟中合成,具有重要的醫(yī)用價值。為制備大量的HSA,以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑如圖1所示;圖2中的甲為獲取的含有目的基因(HSA基因)的DNA片段,Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶,圖中箭頭所指為三種限制酶的酶切位點(diǎn);圖乙是三種限制酶的識別序列與酶切位點(diǎn)示意圖;圖丙是Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖。回答下列問題:

(1)從人體細(xì)胞中直接提取的HSA基因,導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞中不能表達(dá),原因可能是
真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別,轉(zhuǎn)錄不能正確起始;且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子,大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng)
真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別,轉(zhuǎn)錄不能正確起始;且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子,大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng)
。為了獲得能在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)的HSA基因,可從人體的
肝臟
肝臟
細(xì)胞中提取mRNA,通過反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA(雙鏈),再利用PCR進(jìn)行擴(kuò)增,該過程需向反應(yīng)體系中加入
模板DNA
模板DNA
、
Taq聚合酶
Taq聚合酶
、4種脫氧核苷酸、引物和Mg2+,若擴(kuò)增后得到了32個HSA基因,則該過程共需要
62
62
個引物。
(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時,不能選擇限制酶Sau3AⅠ切割目的基因,原因是
限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因
限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因
,為了防止目的基因與質(zhì)粒間的任意連接,應(yīng)選擇限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ切割質(zhì)粒,選擇限制酶
BamHⅠ、EcoRⅠ
BamHⅠ、EcoRⅠ
充分切割目的基因,質(zhì)粒上抗生素抗性基因的作用是
對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測
對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測
。
(3)將目的基因?qū)氪竽c桿菌時,常用
Ca2+
Ca2+
處理細(xì)胞。為了檢測水稻胚乳細(xì)胞中是否合成了HSA蛋白,可用
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
方法;若胚乳細(xì)胞中含有HSA基因,但是檢測不到HSA蛋白,原因可能是
目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想,導(dǎo)致目的基因不能正常表達(dá)
目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想,導(dǎo)致目的基因不能正常表達(dá)
。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別,轉(zhuǎn)錄不能正確起始;且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子,大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng);肝臟;模板DNA;Taq聚合酶;62;限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因;BamHⅠ、EcoRⅠ;對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測;Ca2+;抗原-抗體雜交;目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想,導(dǎo)致目的基因不能正常表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:47引用:1難度:0.6
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  • 1.下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.7
  • 2.下列有關(guān)基因工程的敘述,正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2024/12/31 5:0:5組卷:3引用:2難度:0.7
  • 3.幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分,幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi),可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?;卮鹣铝袉栴}:
    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得?;蛭膸彀?
     
     

    (2)生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時,解開DNA雙鏈的酶是
     
    。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時,使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是
     
    。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的
     
    。
    (3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有
     
     
    ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是
     
    。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時,DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是
     
    。
    (4)提取RNA時,提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
     
    。
    (5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是
     

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6
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