人血清白蛋白(HSA)主要在肝臟中合成,具有重要的醫(yī)用價值。為制備大量的HSA,以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑如圖1所示;圖2中的甲為獲取的含有目的基因(HSA基因)的DNA片段,Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶,圖中箭頭所指為三種限制酶的酶切位點(diǎn);圖乙是三種限制酶的識別序列與酶切位點(diǎn)示意圖;圖丙是Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖。回答下列問題:
(1)從人體細(xì)胞中直接提取的HSA基因,導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞中不能表達(dá),原因可能是 真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別,轉(zhuǎn)錄不能正確起始;且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子,大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng)真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別,轉(zhuǎn)錄不能正確起始;且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子,大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng)。為了獲得能在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)的HSA基因,可從人體的 肝臟肝臟細(xì)胞中提取mRNA,通過反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA(雙鏈),再利用PCR進(jìn)行擴(kuò)增,該過程需向反應(yīng)體系中加入 模板DNA模板DNA、Taq聚合酶Taq聚合酶、4種脫氧核苷酸、引物和Mg2+,若擴(kuò)增后得到了32個HSA基因,則該過程共需要 6262個引物。
(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時,不能選擇限制酶Sau3AⅠ切割目的基因,原因是 限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因,為了防止目的基因與質(zhì)粒間的任意連接,應(yīng)選擇限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ切割質(zhì)粒,選擇限制酶 BamHⅠ、EcoRⅠBamHⅠ、EcoRⅠ充分切割目的基因,質(zhì)粒上抗生素抗性基因的作用是 對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測。
(3)將目的基因?qū)氪竽c桿菌時,常用 Ca2+Ca2+處理細(xì)胞。為了檢測水稻胚乳細(xì)胞中是否合成了HSA蛋白,可用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交方法;若胚乳細(xì)胞中含有HSA基因,但是檢測不到HSA蛋白,原因可能是 目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想,導(dǎo)致目的基因不能正常表達(dá)目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想,導(dǎo)致目的基因不能正常表達(dá)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】真核基因啟動子不能被原核RNA聚合酶識別,轉(zhuǎn)錄不能正確起始;且從真核基因組克隆的基因含有內(nèi)含子,大腸桿菌中沒有轉(zhuǎn)錄后剪接系統(tǒng);肝臟;模板DNA;Taq聚合酶;62;限制酶Sau3AⅠ切割目的基因會破壞目的基因;BamHⅠ、EcoRⅠ;對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測;Ca2+;抗原-抗體雜交;目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想,導(dǎo)致目的基因不能正常表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評】
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