當前位置： 2022-2023學年浙江省杭州地區(qū)（含周邊）重點中學高二（下）期中生物試卷> 試題詳情

菘藍是常用中藥板藍根和大青葉的主要基原植物，有清熱解毒、涼血利咽的功效，可防治病毒性感染。在各地廣為栽培，但常因除草劑的侵害，造成質(zhì)量和產(chǎn)量下降。鏈霉菌中的bar基因序列未知，其編碼的乙酰轉(zhuǎn)移酶能使除草劑的活性成分草丁騰失活，擬利用基因工程技術將bar基因?qū)胼克{中，以獲得抗除草劑的菘藍植株。回答下列問題：
（1）為獲取bar基因，需將鏈霉菌基因組DNA借助載體、微生物等所形成的
基因（組）文庫
基因（組）文庫
中的所有基因進行表達，并用乙酰轉(zhuǎn)移酶為抗原所制備出的靈敏度高的
單克隆抗體
單克隆抗體
來檢測表達產(chǎn)物。在該制備過程中，需從已免疫的小鼠
脾臟
脾臟
（填一器官名稱）中提取B淋巴細胞，并與骨髓瘤細胞共同培養(yǎng)，過程中需采用
聚乙二醇、滅活的（仙臺）病毒、電刺激、離心
聚乙二醇、滅活的（仙臺）病毒、電刺激、離心
等方法誘導其融合（答出2點即可）。
（2）如圖1和圖2為各種限制酶的識別序列在質(zhì)粒、含目的基因的DNA片段上的分布情況。在構建表達載體時，為防止DNA片段反向拼接和自身環(huán)化，需用限制酶
HindⅢ、EcoRⅠ
HindⅢ、EcoRⅠ
（填BamHⅠ、HindⅢ、EcoRⅠ、SmaⅠ中的一種或幾種）同時處理Ti質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段，并用
DNA連接酶
DNA連接酶
進行連接。為提高形成重組DNA的成功率，除上述處理外，還可以采用改變溫度和pH等環(huán)境條件、提高DNA連接酶的濃度、提高目的基因的濃度、
提高DNA連接酶的活性、提高質(zhì)粒的濃度、改變質(zhì)粒和目的基因的比例等
提高DNA連接酶的活性、提高質(zhì)粒的濃度、改變質(zhì)粒和目的基因的比例等
（寫出兩種方法即可）
?
（3）將bar基因?qū)胧荏w細胞。轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌時應添加
CaCl₂溶液
CaCl₂溶液
以利于重組質(zhì)粒進入農(nóng)桿菌細胞；利用含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染稱藍的葉片時，Ti質(zhì)粒上的
T-DNA
T-DNA
可以攜帶bar基因整合到菘藍葉片細胞的染色體DNA上；將葉片轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加入抗生素的作用是
殺滅農(nóng)桿菌
殺滅農(nóng)桿菌
，再轉(zhuǎn)移到含有
草丁膦
草丁膦
培養(yǎng)基上，篩選出已經(jīng)轉(zhuǎn)化的菘藍細胞。
（4）取被侵染的菘藍葉片組織接種到MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)過
器官發(fā)生途徑
器官發(fā)生途徑
或體細胞胚發(fā)生途徑形成轉(zhuǎn)基因植株，該過程中利用了
植物細胞的全能性
植物細胞的全能性
原理。為檢驗bar基因是否表達，在分子水平上可用
核酸探針
核酸探針
來檢測其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。

【答案】基因（組）文庫；單克隆抗體；脾臟；聚乙二醇、滅活的（仙臺）病毒、電刺激、離心；HindⅢ、EcoRⅠ；DNA連接酶；提高DNA連接酶的活性、提高質(zhì)粒的濃度、改變質(zhì)粒和目的基因的比例等；CaCl₂溶液；T-DNA；殺滅農(nóng)桿菌；草丁膦；器官發(fā)生途徑；植物細胞的全能性；核酸探針

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：1難度：0.5

相似題

1．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運用交錯延伸PCR技術獲得了抗蟲性能強的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項正確的是（　?。?br />
注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細胞合成生長素。

A．若用EcoRⅠ（5'-G↓AATTC-3'）和限制酶XmaⅠ（5'-G↓CCGGG-3'）雙酶切多個目的基因，能避免兩個目的基因連接成環(huán)

B．復制原點是RNA聚合酶識別和結合的位點

C．在培養(yǎng)愈傷組織的培養(yǎng)基中添加卡那霉素可以篩選含有Bt重組基因的細胞

D．圖中生長素合成酶基因不能促進愈傷組織生根

發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

解析

2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />

A．若某基因是從人的細胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的，則該基因中不含啟動子序列

B．擴增目的基因時，利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3′-端進行子鏈合成

C．導入人血清白蛋白基因的綿羊受體細胞是乳腺細胞

D．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細胞的染色體DNA上

發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

解析

3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)模化生產(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
（1）通過上述基因工程技術獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是

（填寫下列編號）。
①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
②選用合適的方法獲取目的基因
③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
④目的基因?qū)胧荏w細胞
⑤目的基因和運載體重組構建表達載體
（2）在PCR過程中，引物的功能是

。
A．啟動DNA復制
B．規(guī)定擴增區(qū)間
C．解旋DNA雙鏈
D．充當復制模板

（3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的

。
（4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質(zhì)是

（填DNA或RNA/DNA或RNA）。
（5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的

。
（6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用

和

切開，才能與MCO片段高效連接。
（7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是

。
A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別
發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（ ?。?br />

2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />